Dezenfeksiyon rotasyonunun değerlendirilmesi: Bir alan denemesi tasarlama

Saha denemesi, dezenfektanları kullanım noktasında test ettiği ve etkinliği çevresel izleme verileriyle ilişkilendirdiği için temiz oda için dezenfektan kalifikasyon testlerinin en önemlisidir. Saha denemesi, laboratuvara dayalı testleri ve temel teorik parametreleri (konsantrasyon ve temas süresi gibi) ele alır ve bunları gerçek yaşam koşullarına uygular. Laboratuvar deneme testlerinde kullanılan mikroorganizma sayısının bir temiz oda tesisinde beklenenden daha yüksek olduğundan dolayı temiz oda dezenfektanları için daha büyük bir zorluk oluşturduğu belirtilmektedir.
Saha denemesi yalnızca tek bir dezenfektanın değerlendirilmesini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda uygulama sıklıklarının değerlendirilmesini ve farklı aktivite spektrumuna ve etki biçimlerine sahip tipik olarak ve gerektiği gibi iki dezenfektanın rotasyonu arasında bir değerlendirme yapılmasına olanak tanır. (EU GMP Annex- 1, spor öldürücü ve spor öldürücü olmayanlar arasında rotasyon).

Bu makale, üç farklı derecedeki (EU GMP Derece B, C ve D) temiz odalar arasında bir saha denemesi gerçekleştirmek için benimsenebilecek bir yaklaşımı özetlemektedir. Ecolab tarafından üretilen iki dezenfektanın (düşük kalıntı hidrojen peroksit ve düşük kalıntı kuaterner amonyum bileşiği) kullanıldığı bir vaka çalışmasına dayanmaktadır ve hayatta kalan temiz oda mikroorganizmalarının bir değerlendirmesi ile birlikte yüzey çevresel izleme kullanılarak etkinliğin nasıl değerlendirilebileceğini göstermektedir.

Dezenfektan etkinlik testi
Dezenfektan etkinliği, süspansiyonda (planktonik durumda) veya temiz oda yüzeylerinden mikrobiyal biyolojik yükü kabul edilebilir bir düzeye indirebildiğini göstermek için performans testiyle kanıtlanmıştır. Dezenfektan etkinlik değerlendirmesi, tesiste mikrobiyal kontaminasyonu kontrol etmek için gerekli bakterisit, mantar öldürücü ve/veya spor öldürücü aktiviteyi gösterdiğine dair belgelenmiş kanıt sağlamalıdır.  Yüzey değerlendirmesi yapmak kullanıcıların sorumluluğundadır ve Avrupa İlaç Müfettişliği ve ABD FDA tarafından düzenlenen tesisler için bu zorunludur.Avrupa'da yüzey testi (EN 16615:2015) mekanik işlem ile veya olmadan gerçekleştirilebilir.

Performans Testi ile Dezenfektan Etkinlik Değerlendirme Çalışması
Bu çalışmada, Ecolab’ın Klercide Sporicidal Düşük Kalıntı Hidrojen Peroksit (KSLRP) ve Klercide Düşük Kalıntı Quat (KLRQ) uygulamasından önce ve sonra temiz oda yüzeylerinin mikrobiyal durumunu değerlendirmek amacı ile saha denemesi yapılmıştır. Çalışma, üç farklı EU sterilite sınıfındaki farmasötik temizalanları kapsayan bağımsız bir çalışmadır. Değerlendirmede esas amaç,  mikrobiyal biyolojik yük ve mikrobiyal geri kazanım açısından her sterilite seviyesindeki alan için dezenfektan uygulama öncesi ve sonrası koşullar saptanarak her iki durum arasındaki  farklılıklar incelenmiş, bununla birlikte temiz alanlar ve farklı numune konumları arasındaki farklılıklar da göz önünde bulundurulmuştur.

Rotasyon ve Uygulama Sıklığı
Seçilen iki dezenfektanın da  (KSLRQ ve KLRQ) formülasyonları, etki ettikleri mikroorganizma türleri ve etki mekanizmaları birbirinden farklıdır (Doğru rotasyon yapabilmek için yeter koşul).
Bu çalışmada amaç, dezenfektan performansını (öldürdüğü mikroorganizma sayısı, yüzey-etken uyumu vs.) kupon testi (yüzey etkinlik testi) yöntemi kullanılarak değerlendirilmiştir. Dezenfeksiyon işleminden önce ve sonra numuneler alınmıştır.
Temizoda dezenfeksiyon rejimi ise, aşağıdaki gibidir.
• 4 haftalık dezenfektan KLRQ, ardından1 haftalık dezenfektan KSLRP
• Aynı uygulamayı tekrarlı olarak yapılır
4:1 modelinin (4 hafta KLRQ ile rotasyonda 1 hafta KSLRP), başarısını değerlendirebilmek ve çalışma ile alakalı yeterli veri oluşturmak için toplamda 3 set (15 hafta olmak üzere üç döngü) için uygulamalar yapılmıştır.
Temizalan mikrobiyolojik limitlerini kontrol altında tutabilmek için yeterince büyük bir numune setinin harmanlanması ile çok ihtiyaç duyulan bir kontaminasyon kontrol önleminin uygulanması arasında bir denge kurulması gerekir. (Optimum sporisit sıklığı)
C ve D Sınıfı temizodalar günlük olarak dezenfekte edildi. B Sınıfı temiz oda günde iki kez dezenfekte edildi.
Yukarıdaki çalışmadaki, bakterisit (KLRQ) ve sporisit (KSLRP) bir ürün arasında standart bir rotasyon benimsemiştir. Genel biyolojik yük (aktif alan florası) veya geri kazanılan organizma türleri (özellikle endospor oluşturan bakteri veya mantarlar) var ise, rotasyon revize edilecek ve sporisidal uygulama sıklığı artırılacaktır.

Dezenfektan Uygulama Teknikleri
Her iki dezenfektan için de daha evvel laboratuvar çalışmalarıyla test edilmiş ve belirlenmiş konsantrasyon ve temas süreleri  üzerinden test edildi.
Geniş yüzey uygulamalarında Ecolab Triple Bucket System (sıktırma sistemi valide, steril alan kova sistemi) kullanılarak ‘mopping’ yapılmış, küçük yüzeylerde ise, düşük partiküllü, GMP’ye uygun kuru yüzey bezleri kullanılarak (4’lü silme tekniği – katlama tekniği kullanılarak wiping yapılmıştır
Her iki dezenfektan için de daha evvel laboratuvar çalışmalarıyla test edilmiş ve belirlenmiş konsantrasyon ve temas süreleri  üzerinden test edildi.
Geniş yüzey uygulamalarında Ecolab Triple Bucket System (sıktırma sistemi valide, steril alan kova sistemi) kullanılarak ‘mopping’ yapılmış, küçük yüzeylerde ise, düşük partiküllü, GMP’ye uygun kuru yüzey bezleri kullanılarak (4’lü silme tekniği – katlama tekniği kullanılarak wiping yapılmıştır

Örnekleme
Temiz odaların her biri, tripton soya agar içeren uygun temas plakaları ve dezenfektan nötralizanı kullanılarak (Lesitin, Tween 80, Sodyum Tiyosülfat ve L-Histidin) örneklenmiştir. Kontrollü bir basınç ve süre sağlamak için (örneklemenin tutarlılığını sağlamak amacı ile) bir aplikatör kullanılarak örnekleme yapılmıştır. Plakalar 20-25oC'de üç gün, ardından 30-35oC'de iki gün inkübe edildi.
Bu uygulama, Temizoda bakteri ve mantarlarının geri kazanılması için standart bir kuluçka rejimidir.
Odalar aşağıdaki koşullar altında incelendi:
• Dezenfeksiyon uygulaması öncesinde 6 farklı noktadan örnek alınır (Durum I);
• Dezenfeksiyon uygulaması sonrasında 6 farklı noktadan örnek alınır (Durum II).
Numuneler, temiz alanda sık karşılaşılan üç baskın yüzey malzemesi değerlendirilerek malzemelerin farklı noktalarından alındı:
A. Vinil üzerine alınan zemin numuneleri
B. Paslanmaz çelikten alınan çalışma yüksekliği yüzey numuneleri
C. Akrilik (poliakrilonitril) veya camdan alınan daha yüksek seviyeli numuneler

Kabul şartları
Toplanan veriler aşağıdaki sonuçları değerlendirmek adına incelenmiştir:
A. Temizoda sınıfları için dezenfeksiyon öncesi ve sonrası uygulamalar arasındaki mikrobiyal yoğunluk farklılıkları. ( Monitoring limitlerinde, Annex 1 EU GMP Guide kabul edildi.)
B. Dezenfeksiyon öncesi ve sonrası seanslar arasındaki mikrobiyal düşüş rejimleri
C. Üç farklı temiz oda sınıfı arasındaki farklar
D. Bakteri ve mantar geri kazanımında seçilen örnekler incelendi,
Bu inceleme, her iki dezenfektana karşı potansiyel olarak dirençli suşların değerlendirilmesini içermektedir.

Çalışma Sonuçları
Çalışma sonuçları her bir temiz oda için ayrı ayrı incelenmiştir. Grafikler (şekil 1 ile 3) dezenfeksiyon öncesi ve sonrası sayıların zaman içindeki değişimini gösterir. İki noktalı hareketli ortalama, dezenfektan öncesi ve sonrası biyolojik yük sayımlarını izler. Karşılaştırmaların yapılabilmesi için grafikler aynı ölçekte çizilmiştir



D sınıfı temizoda
Veriler, dezenfektanların uygulanmasının ardından aşağıdaki mikrobiyal sayım azalmasını gösterdi:
• KLRQ kullanımı kaynaklı azalma = %71
• KSLRP kullanımı kaynaklı azalma = %56
• Genel azalma = %7
Dezenfeksiyon öncesi koşul için spesifikasyon dışı olmamasına rağmen yüksek 5  çevresel izleme sonucu bulunmakta idi. Son koşuldaki sayımların önemli ölçüde daha düşük olduğu görülmekte.



C Sınıf Temizoda
Veriler, dezenfektanların uygulanmasının ardından aşağıdaki mikrobiyal sayım azalmasını gösterdi:
• KLRQ kullanımı kaynaklı azalma = %63
• KSSLRP kullanımı kaynaklı azalma = %77
• Genel azalma = %66



B Sınıf Temizoda
Veriler, dezenfektanların uygulanmasının ardından aşağıdaki mikrobiyal sayım azalmasını gösterdi:
• Tipik KLRQ azaltma = %74
• Tipik KSLRP indirimi = %94
• Genel azalma = %79
Dezenfeksiyon öncesi durum için kaydedilen dört yüksek çevresel izleme sonucu vardı. Buna karşılık, son durum değerlendirildiğinde sayımlar önemli ölçüde daha düşüktü.
Her temiz oda, mikrobiyal sayımlarda genel bir azalma gösterdi. Veriler ayrıca, dezenfeksiyon uygulamaları arasındaki sayımlarda önemli bir artış olmadığını da gösteriyor.
Çalışmanın sonucu başarılı oldu. Yerleşik bir tesiste saha denemesinin bir başka uzantısı, yeni rejimin uygulanmasından önce ve sonra çevresel izleme verilerinin istatistiksel bir değerlendirmesi yoluyla yeni dezenfektanın etkinliğini değerlendirmek olabilir.



Genel karşılaştırma
Sonuçlar açısından, Şekil 4 (aşağıdaki tablo) Her temiz oda için uygulamanın her haftasında genel bir düşüş gösteren nihai biyolojik yük (dezenfektan sonrası uygulama)  başlangıç ​​biyolojik yük (ön dezenfektan uygulaması)  ile karşılaştırıldığında farklı seviyeleri gösterir.
Şekil 4, her bir temiz oda derecesi için biyolojik yükte önemli azalmalar elde edildiğini göstermektedir. Biyolojik yükün başlangıcındaki farklılıklar farklıdır, farklı temiz oda derecelerini yansıtmaktadır ve azalmalar temiz oda derecesi ile orantı çıkmıştır.
Göz ardı edilse de, saha denemesinin tamamlanması mevzuat (regülasyon) beklentisidir.

Mikrobiyal değerlendirme
Dezenfeksiyon öncesi ve sonrası rejimler için bir dizi temsili izolat incelenmiştir. Bunun amacı, yüksek sayıda dirençli suşun (endospor oluşturan bakteri veya mantar) geri kazanılıp kazanılmadığını görmekti. Tanımlamalar, bir fenotipik otomatik mikrobiyal tanımlama sistemi (Biolog OmniLog) kullanılarak yapıldı.
Veriler, dezenfeksiyon sonrası izlemeden temiz odalardan hiçbir dirençli suşun geri kazanılmadığını göstermektedir. Spor oluşturan mikroorganizmaların bazı vakaları - Bacillus türleri (bakteriler) ve Aspergillus (mantarlar) ön dezenfeksiyon uygulamasından, çalışmanın başlangıcına yakın bir zamanda tespit edildi. Bu organizmaların önemi, potansiyel olarak dezenfektanlara karşı daha dirençli olmalarıdır. Bu organizmaların insidansları çalışma boyunca devam etmedi (KLRQ'nun vejetatif organizmalara karşı ve KSLRP'nin sporlara karşı etkili olacağı her iki ajanın etkinliğine atfedilebilir).

Özet:
Bu makale, dezenfektan kalifikasyonunun önemli, ancak bazen gözden kaçan bir yönünü tartışmaktadır: Saha denemesi. Göz ardı edilmekle birlikte, saha denemesinin tamamlanması düzenleyici bir beklentidir ve bu makale, Ecolab dezenfektanları (Klercide Sporicidal Low LesiduePeroxide ve Klercide Low Lesidue Quat) tarafından sağlanan iki dezenfektanı değerlendiren bir saha denemesi vaka çalışmasını özetlemiştir. Saha denemesinin sonucu, dezenfektanların etkili olduğu ve seçilen rotasyon modelinin uygun olduğuydu. Veriler ayrıca mikrobiyal sayımların kontaminasyon kademesi yoluyla D sınıfından A sınıfına nasıl düştüğünü de gösterdi. Bu varyasyon, laboratuvar testlerinden tespit edilebilecek bir şey değildir ve saha denemesinin yürütülmesinin önemine daha fazla ağırlık katmaktadır. Dezenfektan rotasyonu açısından, spor oluşturan organizmaların ara sıra geri kazanılması, spor öldürücü bir ajan kullanımının neden önemli olduğunu göstermiştir.
İdeal olarak, bir dezenfektan üreticisi, uygun temas süreleri, konsantrasyon ve dönüş frekansları hakkında bazı tavsiyelerde bulunabilecektir. Ancak saha denemesi, dezenfektan etkinlik testinin son aşaması olarak kullanıcıların kendi tesislerinde gerçekleştirilmelidir. Araştırma bir protokolde özetlenmelidir; bir raporda tartışılmalı; ve bir değişiklik kontrolü ve SOP güncellemelerinin tamamlanmasıyla devreye alınmalıdır. Daha da önemlisi, koşullar değişirse, saha denemesinin tekrarlanması düşünülmelidir.


Yazar: Tim Sandle
Çeviri: Dilara Altaş